實驗方法原理 通過特異的抗原抗體反應標記上可見的顯示物系統來檢查細胞及組織上原位抗原或抗體成分的方法。在光學顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其性質定位，還可以利用細胞分光光度計、圖像分析儀、共聚焦顯微鏡等進行細胞原位半定量測定。免疫組織化學的顯著特點是特異性強。
實驗材料 冷凍切片
試劑、試劑盒 一抗；二抗；三抗（生物素標記的辣根過氧化物酶卵白素）；PBS緩沖液；多聚甲醛；DAB
儀器、耗材 免疫濕盒；滴管；剪刀；進口膜（parafilm）；37度培養箱；移液槍及槍頭；酶標筆（PAP）；光學顯微鏡
實驗步驟
1. 將實驗用試劑從4度冰箱取出，自然平衡至室溫；
2. 將腦片從-20/-80度冰箱中取出，自然平衡至室溫。
3. 用酶標筆在腦片周圍畫圈，防止液體在玻片上溢流。
4. 4%多聚甲醛固定30 min。
5. 0.01M PBS洗，5 minX3次。
6. 0.4% Triton-X100/0.01 M PBS 洗10 min X 1次。
7. 0.01M PBS洗，5 min X 3次。
8. 0.3% H2O2/0.01 M PBS 洗10 min X 1次。
9. 0.01M PBS洗，5 min X 3次。
10. 以10%山羊血清（1：10，以0.01M PBS稀釋），37度恒溫箱放置30 min，一般以40 ul/腦片為宜。
11. 傾去封閉血清液，略干，加一抗，4度冰箱放置過夜。
12. 0.01M PBS洗，5 min X 3次。
13. 加二抗（1：200稀釋度），37度恒溫箱放置1h，一般以40 ul/腦片。
14. 0.01M PBS洗，5 min X 3次。
15. 加三抗（1：300稀釋度），37度恒溫箱放置1h，一般以40 ul/腦片。
16. 0.01M PBS洗，5 min X 3次。
17. DAB顯色（DAB配置：1 ml水中，加1滴A液，混勻后，加1滴B液，再1滴C液），顯色約10 min。
注意事項
1. 內源性生物活性及其消除生物素是一種輔酶，是在脫羧基酶、羧基轉換酶等催化的代謝環節中所產生的羧基中間載體，在應用ABC法染色時會與抗生物素蛋白結合而產生非特異性染色。對含內源性生物素或生物素樣物質較豐富的組織，在應用ABC法前，應預先以0.01％的抗生素蛋白和0.01％生物素溶液分別作用20分鐘左右，以消除內源性生物素活性。每次作用后應用PBS洗5分鐘，更換3次。
此外，最近已有從鏈霉抗生素蛋白（streptavidin）由于其分子中不含寡糖及等電點接近中性（6－6.5），故非特異性吸附很低。同時鏈霉抗生素蛋白可與長臂生物素及過氧化物酶結合成復合物，此為SABC（streptavidin-Biotin-peroxidase Complex）復合物，用SABC取代ABC進行標記，可提高靈敏度（比ABC高約20倍）及降低非特異性著色。現在SABC已有成品的試劑盒出售。SABC法的操作步驟基本與ABC法相同，只不過要用SABC代替ABC標記，即將SABC試劑盒中的A液、B液各取10微升，加入1 ml的PBS中（臨用前配，配好后立即加入切片中）室溫孵育30分鐘。此外第一級抗體和第二級抗體的孵育時間均可縮短至30分鐘以內，故SABC法是一個快速、簡便、敏感及非特異性著色低的檢測方法。
2. 生物素制劑間相互親和性差異很大，因此在應用ABC試劑時，應注意廠家和批號，對購進試劑應進行事先預測，以保證實驗結果的穩定性。
3. 標記過程中應始終保持組織切片的濕潤。
4. 在DAB顯示液中加入鎳等金屬離子，以使反應產物呈藍黑色，并用甲基綠復染核，可加強陽性染色的對比度和提高靈敏度。
5. 在用PBS緩沖液沖洗的過程應盡量沖洗完全，片子表面不留雜質。
6. 準確配比抗體的濃度，因為濃度過高和過低都不利反應地進行，在滴加抗體的時候，做到用量少而均勻。
7. DAB是有毒試劑，使用過程中盡量不污染周圍環境，并且顯色過程中盡量避免DAB見光分解。
8. 滴加每種試劑做到迅速準確，以免片子在反應中干燥。
9. ABC試劑保存溫度以4度為佳，據報告保存達兩年之久，仍能獲得滿意效果，而在-20度，生物活性在短期內即被破壞。