【實驗技巧】BCA法蛋白定量

BCA 蛋白定量法是實驗室常用的蛋白質定量方法。Invent 所有蛋白提取試劑盒提取的蛋白均可使用 BCA 法進行定量！那么今天小編就手把手的教大家該如何用 BCA 來定量！

BCA 法原理

堿性條件下，蛋白將 Cu2+還原為 Cu+，Cu+與 BCA 試劑相互作用形成紫色的絡合物，該水溶性的復合物在 562nm 處顯示強烈的吸光性，吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內有良好的線性關系，因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。

實驗操作具體步驟

1.  梯度稀釋牛血清白蛋白（BSA）標準品（具體操作按試劑盒中說明操作）

2.  制備 BCA 工作液（具體操作按說明書進行）

3.  將各個稀釋濃度的蛋白質標準品和待測蛋白質樣品加入到微孔板或試管中，分別加入 BCA 工作液（比例參照試劑盒說明書）混勻。

4.  密封后，37℃ 保溫 30-60 min

5.  冷卻到室溫，以空白為對照，測量樣品在 562nm 或該波長附近的吸光值

6.  將各個標準品和待測蛋白質樣品在 562nm 處的吸光值減去空白標準品在 562nm 處的平均吸光值。

濃度計算步驟

1. 輸入相對應的標準曲線值和相應的蛋白樣品值。（圖中所示均為舉例說明，具體數據參照自己的實驗結果）選定標準曲線的 OD 值和標準品蛋白濃度。

2. 點擊表頭上的插入-圖表-XY 散點圖，點擊確定。

3. 完成后會彈出一個圖表，點擊圖表里面的散點，右鍵添加趨勢曲線。

4. 完成后彈出設置趨勢線格式，點擊選勾最底下顯示公式（E）以及顯示 R 平方值。則在圖表標題中顯示出公式和 R2 值來。一般 R2 值越接近 1 代表你的標準曲線做得越好，根據標準曲線帶入的樣品 OD 值測出的蛋白濃度也越準確。R2 值越接近 1 越好，一般要求為 0.99 幾左右。

5. 將樣品 OD 值代入標準曲線的公式中，推導即得到待測樣品蛋白的濃度。以 C1 蛋白樣品 OD 值為例，按照圖中模式代入公式，點擊 enter 即為終結果。