實質肝細胞懸浮液的制備

灌流液

1）        無鈣灌流液：每1000ml含NaCl 8.3g、KCl 0.5g、Hepes 2.4g、NaOH（1mol/L）6ml，在37℃時，PH=7.5，滲透壓為315mOsm；

2）        膠元酶灌流液：每100ml含NaCl 0.4g、KCl 0.05g、Hepes 2.4g、CaCl₂·2H₂O 0.07g、NaOH（1mol/L）6.6ml、膠元酶IV 0.05g，在37℃時，PH=7.6，滲透壓為305mOsm；

3）        肝細胞洗液：100ml無鈣灌流液中加入1.5g小牛血清蛋白，在37℃時，PH=7.4。

4）        PBS：每100ml含NaCl 8.0g、KCl 0.2g、CaCl₂ 0.1g、MgCl₂·6H₂O 0.1g、NaH₂ PO₄·2H₂O 1.42g、KH₂ PO₄ 0.2g，在37℃時，PH=7.4

方法：麻醉與手術。于大鼠腹膜腔內注射5%苯巴比妥50mg/kg，將麻醉后的大鼠仰面固定在木板上，木板下墊有吸水棉墊，剪去腹部體毛，用碘酒和酒精消毒腹部皮膚，從腹中線處剪開腹壁，暴露肝臟和與之相連的血管并找出門靜脈和下腔靜脈。將門靜脈與其相連的腸系膜和結締組織分離。用套管針以20度角在門靜脈遠端向近端平行刺入，結扎，固定套管針以封閉門靜脈遠端，立即在下腔靜脈壁上剪開一小口，以便血液和灌流后的液體從此口流出。

灌流：*步用蠕動泵將200ml無鈣灌流液經灌流管道及接在其末端的套管針泵入靜脈，10ml/min，15~20min，第二步用100ml膠元酶繼續灌流，流速5~10ml/min，保持灌流溫度在37℃。

肝臟處理：將經過灌流的肝臟從大鼠腹腔取出，用剪刀剪成0.3cm³大小的碎塊，放入燒杯，在燒杯加入肝細胞洗液100ml，置燒杯在搖床上輕搖6~10分鐘，所得的細胞懸液經孔徑為300μm的尼龍膜過濾后，倒入50ml離心管，低速離心3~5分鐘，棄上清液，再加入PBS 100~150ml，用吸管輕輕吹打沉在管底的細胞，制成肝臟細胞懸液，分離實質細胞和非實質細胞。

湖南湘立研制生產的幾款醫用離心機可以用來進行細胞分離，如DL5M/TDL5M兩種型號的低速冷凍離心機可用來進行干細胞實驗。XL03RH型控溫離心機（低速冷凍離心機）可用來進行溫度敏感型人體細胞分離。