| 實驗步驟 |
材料
牛血清白蛋白（BSA)
脫氧膽酸鈉（0.15%)
三氯乙酸鈉（TCA;72%)
試劑
試劑 A
試劑 B
(配方，見 試劑的配制 pp.234~240)
操作程序
1) 用蒸餾水配制 lmg/mlBSA 溶液，分裝，凍存于-20℃備用。
2) 作標準曲線，于 1.5-ml 微量離心管中配制下列混合物：
3) 用蒸餾水稀釋膜蛋白樣品（1:10)，分別取 5-ul、10-ul、20-ul 等分試樣供測定。對于已溶的膜蛋白或 WGA 柱層析組分，不必稀釋，取 10ul 即可。另取 10ul 緩沖液于空白對照管，用以測定緩沖液組分的吸收值。
注：如無干擾物質、其含量可忽略或經適當控制，則第 4~8 步可省略。在這樣的情況下,用蒸餾水將每個樣品稀釋至 0.4 ml。
4) 用蒸餾水稀釋膜蛋白樣品至 1 ml。
5) 每管加 0.1 ml 0.15% 脫氧膽酸鈉。混合，室溫放置 10 min。
6) 每管加 0.1 ml 72%TCA。混合，室溫下微型離心機離心 15 min。
7) 棄上清。可有效地用吸管吸出。
8) 每管加 0.4 ml 蒸餾水。
9) 每管加 0.4 ml 試劑 A，震蕩混勻，室溫放置 10 min。
10) 每管加 0.2 ml 試劑 B, 立即混合。室溫孵育 30 min。
11) 750nm 下讀吸光度。
注：在 2 h 之內讀吸光度，除非各樣品組中都包含有標準蛋白樣品。室溫下每小時腿色為 1%~2%, 將 8~10 步的體積縮小 10 倍，增加其靈敏度，此法可容易地轉為微量測定。除作標準曲線時，蛋白用量減為 0.1~10ug 外，1~7 步均與常量測定同。
12) 以標準樣品管中的蛋白量對 750nm 吸光度作圖，繪出標準曲線。
13) 根據各被測樣品在 750nm 處的吸光度，從標準曲線査出該樣品的蛋白含量。 |
