眼部有明顯癥狀的，結合喂養史，慢性消化系統或消耗性疾病史，診斷并不困難。因維生素A缺乏時常有合并癥，故凡營養不良、慢性腹瀉、慢性痢疾、或麻疹后長期忌嘴，患兒有畏光、眨眼者應仔細檢查眼部。年長兒應注意皮膚的改變。早期及非典型的病例，眼部的變化較輕，特別在嬰幼兒期容易忽略。對可疑病例可做下列檢查有助于診斷：
1、用小棉拭子蘸生理鹽水，自結膜面上輕輕刮下少許物質，在顯微鏡下可見到角質上皮細胞；
2、血清維生素A測定是最可靠的指標，正常小兒血清維生素A值一般為300～500μg/L，患缺乏癥時則減少至200μg/L甚至100μg/L以下；
3、取新鮮中段尿約10mg加1%龍膽紫溶液數滴，搖勻，做上皮細胞計數。每立方毫米的正常尿至多含皮皮細胞3枚；超過3枚以上者除泌尿系炎癥外，可表示維生素A缺乏。用高倍顯微鏡檢查尿沉淀，更可測知上皮細胞角質變性的程度。
若食物中維生素A缺乏或有吸收障礙，可在數星期內出現癥狀。小嬰兒患先天性膽道梗阻、嬰兒肝炎綜合征，若并發肺炎則可在短時間內出現眼干燥癥，應及早注意。