主要針對的反向色譜柱而講！
1.色譜柱簡介
最常用的色譜柱填充劑為化學鍵合硅膠。反相色譜系統使用非極性添充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠(如氰基硅烷鍵合相和氨基硅烷鍵合相等)也有使用,正相色譜系統使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換填充劑用于離子交換色譜;凝膠或高分子多孔微球等填充劑用于分子排阻色譜;手性鍵合填充劑用于對映異構體的拆分分析。
填充劑的性能(如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團的表面覆蓋度、含炭量和鍵合類型等)以及色譜柱的填充，直接影響待測物的保留行為和分離效果。孔徑在15nm(1nm=10埃)以下的填料適合于分析分子量小于 2000的化合物，分子量大于2000的化合物則應選擇孔徑在30nm以上的填料。以硅膠為載體的一般鍵合固定相填充劑適用PH2~8的流動相。當PH大于8時，可使載體硅膠溶解;當PH小于2時，與硅膠相連的化學鍵合相易水解脫落。當色譜系統中需使用PH大于8的流動相時，應選用耐堿的填充劑，如采用高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包裹聚合物填充劑、有機-無機雜化填充劑或非硅膠填充劑等;當需使用PH小于2的流動相時，應選用耐酸的填充劑，如具有大體積側鏈能產生空間位阻保護作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機-無機雜化填充劑等。
2.色譜柱的沖洗體積確定
一般情況都是沖洗色譜柱10-20倍柱體積，具體可以這樣計算，根據柱內徑和柱長算出色譜柱內體積。短柱一般時間就是30分鐘、長柱一般沖洗60分鐘就可以了。舉例：內經為4.6mm、長250mm，其柱內體積=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分鐘，折中取15被柱內體積，則沖洗時間就出來了。
3.色譜柱沖洗
沖洗色譜柱最好在分析結束后，用流動相沖洗到基線平穩，然后用10%左右的有機溶劑沖洗色譜柱，主要是沖洗干凈流動相中的緩沖鹽。然后用100有機溶劑沖洗。最好是梯度變化沖洗。分析物可能為一些能溶解在水中，有些需要用純溶劑才能完全去除。如果分析時間緊迫一定要把鹽分沖洗干凈，一般情況不要用純水沖洗色譜柱，特別是反向柱的填料的鍵合集團容易折斷，對色譜柱造成損傷。色譜柱被使用在某種程度上就是開始被污染了，所以色譜柱的壽命和我們使用的情況有很大的關系。雖然被污染但是對我們分析目標物沒有造成影響我們也就是認為還能用。
4.色譜柱維護沖洗
常見故障篩板阻塞，解決辦法是：a、過濾流動相;b、過濾樣品;c、運用在線過濾或保護柱。
柱頭塌陷解決方法是：：a、避免使用PH>8的流動相(針對大部分硅膠的柱子);b、使用保護柱 ;c、使用預柱(飽和色譜柱)。
前面談到的不管用什么溶劑一定要加入一定比例的用機溶劑，主要是考慮到一些疏水基團在有機溶劑里面容易伸展利于沖洗其包藏的雜質等。當我們的色譜柱在壓力和柱效下降時，我可以拆開泵近端柱頭的螺絲取出篩板，清洗篩板以及觀察里面的填料，如填料污染嚴重，就要進行挖取一部分被污染的填料然后用其他廢棄的柱子相同填料來填補，用新的篩板或清洗好的篩板擰好螺絲。然后沖洗觀察柱壓變化和測試柱效等。
5.特殊沖洗
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由于強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現出來，但對許多樣品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈清洗色譜柱。
清洗方法：
1.未使用緩沖鹽：每天分析完成后，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。
2. 使用過緩沖鹽：分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱 60min。
3.補救方法：
水——乙腈——氯仿(或異丙醇)——乙腈——水
每一步以 1.0ml/min 流速反向沖洗色譜柱 60min。
希望大家提出更好的建議和辦法。