首先應當制備試驗用抗原，如有合格商品可直接購買。可以作為變應原的物質種類繁多，例如動物皮毛、家禽羽毛、鴿糞、昆蟲、螨類、真菌、花粉、雜草、物理粉塵和各種食品等都可能成為變應原。
不同抗原的制備方法不同，但一般包括以下幾個步驟：①收集原料；②粉碎與勻漿；③脫脂與提取；④過濾與分離；⑤分裝保存。分裝保存之前應對提取產物進行鑒定。首先必須經過無菌試驗、急性毒性試驗和熱原檢查，保證提取產物無明顯的毒副作用；還要測定產物的蛋白含量，用凱氏定氮法或磷鎢酸沉淀法標定出總氮單位或蛋白氮單位。
試驗部位應清洗干凈，嚴格消毒，以免皮膚的不潔物引起非特異性反應或感染。當皮膚患濕疹、感染、皮炎或外傷時不宜進行皮膚試驗。正在或近日服用免疫抑制劑或抗組胺藥物者也不宜進行皮膚試驗。