1、化學轉染法
(1)DEAE-葡聚糖和polybrene聚陽離子法:帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體復合物和帶負電的DNA分子使得DNA可以結合在細胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克將DNA復合體導入。DEAE-葡聚糖僅限于瞬時轉染。
(2)磷酸鈣共沉淀法 :將氯化鈣、DNA和磷酸鹽緩沖液混合,形成磷酸鈣微沉淀 ,附著于細胞膜并經過細胞內吞作用進入細胞質。
該方法的轉化效率通常很低。
(3)脂質體染法 :脂質體能在體內或體外提供運載外源性遺傳物質進入細胞的載體。脂質體介導的基因轉移的最大優勢在于能在活體內應用。
2、生物方法
(1)直接注射法 :將含有DNA的溶液直接注射到肌肉,以引起鄰近的細胞攝入DNA鏈進行表達,在肌細胞中,基因表達可持續數月。
(2)受體介導的基因轉移 :依靠受體介導的細胞內吞途徑以轉移外源基因。受體介導的基因轉移方法是在質粒DNA和某種特異的多肽(配體)之間形成復合體,而這種多肽能為細胞表面的受體所識別。如若將DNA在體內運送至肝內,可以選將DNA和能與肝細胞受體特異結合的去唾液酸糖蛋白質偶聯,以便通過細胞內吞過程而被攝入,這種DNA大部分被肝臟所攝取。應用該方法轉移的外源基因在活體內的表達持續時間較短,在評估實際應用前景上還存在一些問題。
(3)精子載體法 :用精子和NDA(吡啶核甘酸輔酶 )-劑孵育,可捕獲得DNA。通過受精過程,將外源性基因導入受精卵,大大簡化了轉基因動物的制備過程。 這項轉染方法是才發展出來應用在魚類轉殖的最新技術,它最大有點就是簡單方便。
3、物理方法
(1)微粒子轟擊法(基因槍) :在真空狀態下,利用粒子加速器將外面包裹了外源基因DNA的金顆粒或鎢粉微顆粒進行加速,打入完整的細胞中,從而使外源基因DNA得以在靶細胞中穩定轉化并有可能獲得表達。實驗結果表明,用這種方法靶基因可在皮膚、肌肉、肝、胰、胃和乳腺等細胞中表達。
(2)顯微注射法:在顯微鏡下,將DNA經同細胞玻璃針直接注入細胞,該法適合于各種培養生長的細胞,但需要一定的設備和操作技巧。
(3)電穿孔法:電穿孔通過將細胞暴露在短暫的高場強電脈沖中轉導分子。即利用脈沖場將DNA導入培養細胞。電脈沖和場強的優化對于成功的轉染很重要。