基于適配體構建百草枯殘留檢測免疫新方法

近日，貴州大學Liu等人成功地制備了一種靈敏度高、選擇性好、穩定性好的百草枯層析試紙條(CS)。與以前報道的基于免疫分析的層析紙條不同，該研究使用了聚二烯丙基二甲基氯化銨(PDDA)作為T線上的強大捕獲分子，可以使制備的CS在儲存過程中具有很高的穩定性。同時，使用百草枯PQ-15適配體，它是一種用于檢測的良好識別分子。該方法不僅使制備的殼聚糖更具成本效益和穩定性，而且為百草枯的選擇性檢測提供了快速、簡便的優勢。CS的線性范圍為20~150 μg/L，檢出限低至428 μg/L。此外，CS能用肉眼定量分析濃度大于30 μg/L的百草枯，檢測過程可在3分鐘內完成。

原理示意圖

用透射電子顯微鏡對所制備的納米顆粒和納米復合材料的形貌進行了表征。AuNPs是均勻分散的顆粒，尺寸為10-15 nm。經適體修飾后的AuNPs(如箭頭所示)的表面顯示了明顯的膜性物質。此外，為了進一步證明AuNPs與適配子之間的反應，對樣品進行了凝膠電泳法分析，并用紫外光激發成像觀察了核酸的熒光。圖C中的圖像顯示AuNP-適配子(第4道)的相對分子質量大于單獨的適配子(第2道)，這表明AuNP-適配子復合體成功形成。同時，AuNP-適配子的樣品以單一尖銳條帶的形式遷移。可以推斷AuNP-適配子納米顆粒的遷移率是相似的，這表明每個金納米顆粒上的適配子分子數量大致相同。如圖D所示，由于表面有大量的檸檬酸根離子，AUNPs顯示出-49.43 mV的高度負電荷，而負電荷為-6.14 mV的核酸適體(PQ-15)占據了AuNPs的表面，使其負電荷降至-3.17 mV。

ImageJ分析T線和C線的檢測結果圖像和定量檢測結果(A)與不同測試條T線的顏色強度(B)

該方法與先前報道的基于免疫測定的層析方法不同，使用聚（二烯丙基二甲基氯化銨）（PDDA）作為T線處的捕獲分子，儲存期間具有高穩定性。同時，PQ-15適體被用作制備的CS中百草枯檢測的優良識別分子。該策略不僅使制備的CS更具成本效益和穩定性，而且為選擇性百草枯檢測提供了快速簡便的優勢。CS表現出20-150?μg/L的寬線性范圍和低至4.28?μg/L的檢測限。此外，CS能夠通過肉眼對大于30? μg/L的百草枯濃度進行定量分析，檢測過程可在3? min內完成。因此，所制備的CS可廣泛用于農產品中農藥殘留的檢測。