試劑、試劑盒 瓊脂胰化蛋白胨NaClNaOH四環素
儀器、耗材 玻璃瓶燒瓶
實驗步驟
一、極限培養基平板
800 ml水加入15 g瓊脂，高壓滅菌15 min。然后加人200 ml無菌的5 X 極限培養液和碳源。待冷卻至50°C，加人補充成分。每個10 cm平板倒入32~40 ml 培養基（每升培養基可制作25?30個平板）。于室溫干燥2?3天，或將平板的上蓋稍 微打開，于37°C或在層流通風櫥干燥30 min，將晾干的平板包裹好儲存于4°C。
二、豐富培養基平板
將水加人以下所列出的培養基配方的成分中，定容至1L，高壓滅菌25 mm。待冷卻至50°C，加人補充成分。每個LB或H培養基平板倒人32~40 ml培養基（每升培養基可制作25?30個平板），每個λ肉湯培養基平板倒人約45 ml培養基（每升培養基可制作20個平板）。平板的干燥和保存如上所述。
1. H 平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
15 g 瓊脂
2. λ肉湯平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
10 g 瓊脂
3. LB平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
1 ml 1 mol/L NaOH
15 g 瓊脂或者瓊脂糖
三、添加物
其他的抗生素和半乳糖苷
1. 抗生素（如果需要）：
氨芐青霉素 50 μg/ml
四環素12 μg/ml
2. 半乳糖苷（如果需要）：
X-gal終濃度為 20 μg/ml
IPTG終濃度為0. I mmol/L
四、頂層瓊脂培養基
頂層瓊脂培養基常用于將噬菌體或細胞在平板的表面均勻分布成一薄層。以1 L的 批量配制頂層培養基，高壓滅菌15 min使之熔化，冷卻至50°C，輕輕旋轉晃動使其混 合均勻，分裝至100 ml瓶中。再次高壓滅菌，冷卻，擰緊蓋子，于室溫保存。使用前， 用水浴或者微波爐熔化頂層瓊脂，冷卻至45?50°C并維持在該溫度。頂層瓊脂中瓊脂 的含量比普通平板的少，在該溫度下，頂層瓊脂可保持熔化狀態數天。
1. LB 頂層培養基，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
7 g 瓊脂
2. γ頂層球脂培基，每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
7 g 瓊脂
3. 頂層瓊脂糖培養基，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
6 g 瓊脂糖
五、穿刺瓊脂培養基
穿刺瓊脂培養基用來保存菌株。加人胸腺嘧啶則可使thy-細菌生長。據認為，半胱氨酸可很大程度地延長細菌在穿刺培養物中的存活時間。
1. 穿刺培養基，每升
10 g 營養肉湯
5 g NaCl
6 g 瓊脂
10 mg 半胱氨酸鹽-Cl
10 mg 胸腺嘧啶