吉姆薩染色實驗

原位雜交玻片

吉姆薩染色液 磷酸鈉緩沖液 乙醇 二甲苯

染色盤 培養箱 濾紙

1.  將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤中。

（1）1個盤：pH6.8 10 mmol/l 磷酸鈉緩沖液，所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。

（2）3個盤：水。

（3）脫水系列溶液：

①3個盤：分別盛50%、70%和95%乙醇。

②2個盤：盛有100%乙醇。

③3個盤：盛有二甲苯。

3.  在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s（依染色時間決定染色的強弱），將玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

4.  連續用乙醇脫水系列溶液處理，每盤中浸泡2 min，將玻片移至二甲苯盤中，毎次浸泡2 min，共3次。

5.  在通風櫥中，按如下操作壓片固定：用一平頭鑷（拿在左手），從二甲苯中取出一塊玻片，夾住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端（切片所處位置），左手拿一干凈的蓋玻片，很緩慢地放在載玻片上（在加壓片固定介質和蓋玻片前，勿使玻片變干，因微小氣泡會造成人為假象）。

6.  用3MM 濾紙，沿蓋玻片邊緣，小心吸去多余固片介質/二甲苯，并擦拭載玻片背面（勿擦拭蓋玻片）。

7.  將玻片平放于一硬紙盒盤上，置42℃溫孵箱2天使之凝固。

8.  以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳，染料及固片介質。用鏡頭紙或普通棉紙擦去塵埃。放入玻片盒，必要時，載玻片上再注明標簽。

9.  顯微鏡觀察玻片，觀察時可依信號強弱，調節光亮。

1.  勿將玻片直立存放于玻片中，因此時固片介質尚未凝結。

2. 細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經片一定清潔，要無酸堿污染。

3. 配制頊特液一定用優質甲醇，稀釋染色一定用緩沖液，沖洗一定用水應近中性，不然可導致各種細胞染色反應異常，以致于識別困難，甚至造成錯誤的。

染色實驗與染色濃度，細胞的多少，室溫有關，染液淡，溫度低，細胞多則染色時間較長，反之，可減少時間，必要時可增加染液量或增加時間。沖洗前，需要在低倍顯微鏡下觀察染色是否核質分明，是否染色清楚。