威斯騰生物經過10多年的發展,獲得了上百種細胞株和四十余鐘原代細胞培養經驗,并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫;細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件,萬級凈化細胞房,這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。
同時,威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗,結合平臺已有的技術優勢,建立了完善的體外藥篩實驗,并引進RTCA(Real-time cellular Analysis,實時無標記細胞記錄儀),在藥篩過程中,全程實時記錄細胞真實狀況,為藥篩提供最真實精準的實驗數據。
威斯騰生物與上海中科院生物與細胞所化學生物學技術平臺合作,享有英國國家醫學研究院科技轉化部MRCT獨家提供的約1萬種核心結構小分子化合物庫資源,基于成藥性結構設計,特別適于進行以新藥研發為目的的活性化合物篩選。精選SiRNA庫,包含20個亞庫,可根據需求定制提高通路篩選。
原代細胞培養經典案例
1、淋巴細胞的原代培養
淋巴細胞主要來源:脾臟、外周血
分離方法:Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度離心法,因為血液中各成分的比重存在差異,因此得以分離。
分離效果:單個核細胞純度可達95%,淋巴細胞約占90%~95%,細胞獲得率可達80%以上,其高低與室溫有關,超過25℃時會影響細胞獲得率。
步驟:
1)眼球取血,將血液滴入肝素抗凝管中,加入PBS按1:1稀釋血液(一般采血管2mL+2mL)。
2)取淋巴細胞分離液2mL于15mL滅菌離心管中待用。
3)吸取稀釋血液,在離分層液上方1cm處,沿試管壁徐徐加入,使稀釋血液重疊于分層液上,并與分離液形成明顯界面。
4)室溫,離心2000rpm,20min。此時離心管中形成5層:最上面是血漿,血漿層和淋巴細胞分離液之間是淋巴細胞層呈白膜狀。
5)小心吸取中間呈白膜狀的淋巴細胞層,盡量全部吸出。加5倍以上體積的PBS洗2次,每次離心1500rpm,10min。
6)去上清液,加入1640培養基1mL混勻,取少量進行細胞計數。
7)用臺盼藍染液檢查所分離的細胞活性:活性應在95%以上。
8)接種后培養,條件為37℃、5%CO2、飽和濕度。3d后,每48h添加等體積的新鮮培養基。

淋巴細胞
2、乳鼠心肌細胞的原代培養
原理:
乳鼠心肌細胞屬于原代生長細胞。心肌組織中心肌細胞約占50%,非心肌細胞占50%,用酶消化法將心肌組織碎塊經純化分離成單個心肌細胞,用培養基制成心肌細胞懸液,內心肌細胞可達95%,在體外適宜條件下,使心肌細胞生長繁殖,并保留其一定的結構和功能特性。在乳鼠心肌細胞培養實驗中能直接觀察到培養心肌細胞生命活動的動態過程,還可利用電鏡手段、同位素標記、放免法和免疫組化法來研究細胞形態結構及細胞內化學物質的分布。
步驟:
1)新生乳鼠剪開胸,取心尖部位。
2)剔除周圍結締組織,將心臟置于無菌平皿中,將心臟盡量剪碎,平皿內加入適量0.125%的胰酶,在37℃培養箱中,采用分次消化,每次消化5min,一共消化8-10次。
3)每次消化后取上清液,中和胰酶的消化,防止消化過度。用200目過濾篩過濾混合液。離心后收集沉淀,用PBS再次重復離心3次。用細胞培養基將細胞沉淀重懸,接種于細胞培養瓶中培養。
4)培養90min左右,將未貼壁的細胞懸液吸出。此時已經貼壁的是心肌成纖維細胞。
5)將未貼壁的細胞懸液放入新的培養瓶中繼續培養,并每日觀察心肌細胞的生長。

心肌細胞48h