原代細胞分離和培養基本步驟

 1、器官和組織的選擇

    盡可能的去除不必要的組織和血跡。

    2、原代細胞的分離

    （1）應用PriCells原代細胞分離試劑盒I、II、III。

    （2）根據組織來源不同，可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒。

    3、原代細胞的培養：

    （1）PriCells原代細胞特制培養基

    （2）PriCells原代細胞特制添加物

    （3）優質胎牛血清

    4、細胞的培養和鑒定：

    PriCells原代細胞鑒定試劑盒

    4、原代細胞的傳代、保存

    （1）傳代：依椐細胞的生長狀態，生長的細胞1：2或1：3進行傳代。

    （2）保存：DMSO＋培養液＋血清

    按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘）→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（－80℃  過夜）→液氮。

    5、原代細胞的復蘇

    （1）取出細胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。

    （2）吸出細胞懸液，并加10倍以上培養液。

    （3）用培養液適當稀釋后接種培養瓶，放入37℃ CO2培養箱靜置培養。