分離微管和微管相關蛋白實驗

腦組織

PME 緩沖液

勻漿器

1. 收集腦組織（幾百克）

(1) 如果從屠宰場取腦（豬）

① 只要美國地方檢察官允許，在宰殺后盡快收集腦（豬 )。

② 把腦一個一個地放在薄塑料袋里，立即浸入冰水混合物中，運到實驗室。

③ 在冰庫里，研究者帶著橡膠手套取出腦、表面的血管、血凝塊和腦膜。

④ 用剪刀把腦剪成小塊（1~2 cm），放到冰浴的小燒杯中。

(2) 如果是買的雞

① 用鋒利的剪刀將雞斷頭。

② 將腦取出放到冰浴的燒杯中。

2. 每克腦加 1 ml PME，在一個 50 ml 用馬達驅動（3000 r/min）的勻漿器中用研杵上下各 7 次進行勻漿。這種勻漿器是玻璃筒，Teflon 研杵；每次處理 20~25 g。

PME 緩沖液：

0.1 mol/L PIPES，pH 6.9

2 mmol/L EGTA

1 mmol/L MgSO₄

1 mmol/L DTT

0.5 mmol/L GTP

3. 勻漿物在 4℃ 以 40000 g 離心 45 分鐘。把上清轉移到一個新管中，上清里含冰冷的溶解了的微管蛋白二聚體和微管相關蛋白。

4. 上清在 37℃ 溫育 30~45 分鐘。

5. 在 25℃ 以 40000 g 離心 30 分鐘收集組裝了的微管。用一個 Dounce 的勻漿器，用步驟 2 中使用的緩沖液以 1/5~1/4 的體積重懸所得到的微管沉淀物，重懸的微管放到一個干凈的離心管中。

6. 在冰/水混和物中冰浴 30 分鐘。

7. 在 4℃ 以 40000 g 離心 30 分鐘使溶液變清。

8. 步驟 7 中得到的微管蛋白通過重復步驟 4 和 5 再做一輪組裝。