同種細胞在培養時2個靠在一起的細胞自發合并,稱自發融合;異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合,稱誘發融合。
一、仙臺病毒法融合
①兩種細胞在一起培養,加入病毒,在4℃條件下病毒附著在細胞
膜上。并使兩細胞相互凝聚;
②在37℃中,病毒與細胞膜發生反應,細胞膜受到破環,此時需
要Ca2+和Mg2+,最適PH為8.0一8.2;
③細胞膜連接部穿通,周邊連接部修復,此時需Ca2+和ATP;
④融合成巨大細胞,仍需ATP。
二、聚乙二醇(PEG)法
聚乙二醇(PEG)結構為:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。PEG經高壓滅菌后,與溫熱的Engle氏液混合。一般選用分子量為4,000,常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3調整),分子量小的PEG,融合效應差,又有毒性,分子量過大,則粘性太大,不易操作。
三、電融合法
在直流電脈沖的誘導下,細胞膜表面的氧化還原電位發生改變,使異種細胞粘合并發生質膜瞬間破裂,進而質膜開始連接,直到閉和成完整的膜,形成融合體。
優點:融合率高、重復性強、對細胞傷害小;
裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程;
免去PEG誘導后的洗滌過程、誘導過程可控性強。
四、離心振動
物理方法之一,使用離心機等機器實現細胞之間的融合。