（1）光照：光照對離體培養物的生長發育具有重要的作用。通常對愈傷組織的誘導來說，暗培養 比光培養更合適。但器官的分化需要光照，并且隨著試管苗的生長，光照強度需要不斷地加強，才能使 小苗生長健壯，并促進它從“異養”向“自養”轉化，提高移植后的成活率。
（2）溫度：離體培養中對溫度的調控要比光照顯得更為突出。不同的植物有不同的最適生長溫度。
（3）濕度：組織培養中的濕度影響主要有兩個方面，一是培養容器內的濕度，它的濕度條件常可 保證?100%；二是培養室的濕度，它的濕度變化隨季節和天氣而有很大變動。培養室濕度過高過低都是 不利的，過低可能造成培養基失水而干枯或滲透壓升高，影響培養物的生長和分化；濕度過高會造成雜 菌滋長，導致大量污染。因此，培養某些耗氧多的植物，采用通氣性好的瓶蓋、瓶塞或透氣膜封口的， 要求室內保持?70%~80%的相對濕度。濕度過高時可用除濕機降濕，過低時可用噴水來增加濕度。
（4）氧氣：植物組織培養中，外植體的呼吸需要氧氣。在液體培養中，振蕩培養是解決通氣的有 效辦法。在固體培養中，對于某些耗氧多的植物要采用通氣性好的瓶蓋、瓶塞，或用透氣膜封口。對于 耗氧少的植物，組織培養中培養瓶內能維持正常的氧氣和二氧化碳循環，用密封性好的封口材料更能有 效地防止菌類污染。 此外，愈傷組織在培養基上生長一段時間后，由于營養物質的枯竭，水分的散失，以及一些組織代 謝產物的積累，必須將組織及時轉移到新的培養基上。這種轉移過程稱為繼代培養。一般在?25~28℃下 進行固體培養時，每隔?4~6周進行一次繼代培養。在組織塊較小的情況下，繼代培養時可將整塊組織轉 移過去。若組織塊較大，可先將組織分成幾個小塊再接種。