1、底物溶液的制備
取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯23.7mg，置100ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（取0.067mol/L磷酸二氫鉀溶液38. 9ml與0.067mol/L磷酸氫二鈉溶液61.1ml，混合，pH值為7.0）50ml，溫熱使溶解，冷卻后再稀釋至刻度，搖勻。冰凍保存，但不得反復凍融。
2、供試品溶液的制備
精密稱取本品適量，加0.0012mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中含12～16糜蛋白酶單位的溶液。
3、測定法
取0.0012mol/L鹽酸溶液0.2ml與底物溶液3.0ml，照紫外－可見分光光度法（2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），在25℃±0.5℃，于237nm的波長處測定并調節吸光度為0.200。再取供試品溶液0.2ml與底物溶液3.0ml，立即計時并搖勻，每隔30秒鐘讀取吸光度，共5分鐘（重復一次），吸光度的變化率應恒定，恒定時間不得少于3分鐘。若變化率不能保持恒定，可用較低濃度另行測定。每30秒鐘的吸光度變化率應控制在0.008～0.012，以吸光度為縱坐標，時間為橫坐標，作圖，取在3分鐘內成直線部分的吸光度，按下式計算。
式中P為每1mg糜蛋白酶的效價，單位；A2為直線上開始的吸光度；A1為直線上終止的吸光度；T為A2至A1讀數的時間，分鐘；W為測定液中含供試品的量，mg；0.0075為在上述條件下，吸光度每分鐘改變0.0075，即相當于1個糜蛋白酶單位。