（一）病理檢查可見陰囊皮損處表皮顯著角化，顆粒層減少或消失，重癥病例除表皮角化過度外，基層細胞有色素減少或消失。真皮內毛細血管有不同程度擴張。唇 、舌等上皮也見角化，舌乳頭萎縮者組織象亦顯著萎縮。
（二）尿核黃素測定 以每克肌酐表示。為了診斷的可靠性，最好收集24小時尿測定。結果<27μg/每克肌酐，提示成人維生素B2缺乏，小兒值高于成人。
（三）尿排泄負荷試驗 口服負荷劑量的核黃素5mg，收集4小時尿測定排泄量。成人排泄量<1000μg為核黃素缺乏。
（四）紅細胞谷光甘酞還原酶（EGR）功能試驗臨床上選擇該試驗作為評價維生素B2營養狀況的最新的簡便易行的方法。該試驗以"FAD效應"為衡量指標。加入FAD后，酶活性上升超過20%者，提示組織中核黃素儲存量不足。