一般實驗室檢查與其他溶血性貧血相似，依據紅細胞G-6-PD酶活性的測定進行診斷。篩選實驗和酶活性定量測定方法有如下幾種：
1.熒光斑點試驗
正常10分鐘內出現熒光，中間型者10～30分鐘，嚴重缺乏者30分鐘仍不出現熒光。該實驗簡單易行，敏感性和特異性均較高。
2.硝基四氮唑藍試驗
紙片法檢測NADPH生成量，正常濾紙片呈紫藍色，中間型呈淡藍色，顯著缺乏者呈紅色。
3.高鐵血紅蛋白還原試驗
正常還原率大于0.75，中間型為0.74～0.31，顯著缺乏者小于0.3.此試驗的缺點是如果存在HbH、不穩定血紅蛋白、高脂血癥、巨球蛋白血癥等均造成假陽性結果，所以應結合其他試驗室檢查綜合判斷。
4.G-6-PD活性測定
通過單位時間生成NADPH的量來反映紅細胞G-6-PD活性。常用方法有世界衛生組織（WHO）推薦的Zinkham法和國際血液學標準化委員會（ICSH）推薦的Glock與Mclean法。
5.血象
在慢性非球形紅細胞溶血性貧血，無特異性血液學改變。血紅蛋白一般為80～100g/L，網織紅細胞計數增高至4%～35%，由于網織紅細胞數比例增高，因而平均紅細胞體積增高。紅細胞半壽期明顯縮短，一般為2～17天。無缺陷細胞的脾臟扣留，因此切脾一般無效。自身溶血試驗無診斷價值。在一些嚴重G-6-PD缺乏癥患者，由于白細胞G-6-PD缺乏癥可出現白細胞功能缺陷，主要是噬菌活性減低，因而臨床主要表現為過氧化物酶陽性細菌的反復感染。
6.膽紅素測定
大部分病例的血清總膽紅素濃度超過273.6μmol/L，甚至有高達684～8557μmol/L者。由于黃疸程度較重，可導致相當一部分的患兒出現膽紅素腦病，其發生率為10.5%～15.4%。
7.常規做胸片、心電圖和B超檢查
注意有無肺部感染，可發現膽石、肝脾大等。