照高效液相色譜法（2010年版藥典二部附錄Ⅴ D）測定。
1、色譜條件與系統適用性試驗
用辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈－0.075mol/L磷酸二氫鉀溶液－1.0mol/L枸櫞酸溶液（30：30：36：4）為流動相；檢測波長為254nm。取利福平對照品、醌式利福平對照品、N-氧化利福平對照品和利福霉素SV對照品各適量，加乙腈適量（約10mg加1ml乙腈）溶解后，再用乙腈-水（1：1）稀釋制成每1ml中各約含0.04mg的混合溶液[醌式利福平與N-氧化利福平在此溶液中產生的雜質A（即醌式利福平后相鄰的雜質）]，取10μl注入液相色譜儀，醌式利福平峰與雜質A峰、利福平峰與利福霉素SV峰之間的分離度均應符合要求。
2、測定法
臨用新制或存放于2～8℃條件下6小時內使用。取本品適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液；精密量取適量，用乙腈-水（1：1）定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，作為供試品溶液，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取利福平對照品適量，精密稱定，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。