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    發布時間:2023-06-26 07:41 原文鏈接: 關于乳糜微粒的免疫透射比濁法注意事項

      ① 關于抗血清:比濁測定與其他方法相比對抗血清的要求更高。比濁法以用多克隆抗體為宜。抗血清中必須不含雜抗體。必須十分重視從人血清中提取的apoA-Ⅰ達到免疫純、色譜純與電泳純,這不是一般實驗室都能做到的。抗血清效價(滴度)不可低于16。目前國內某些商品試劑中,apoA-Ⅰ抗血清效價極低,選購試劑盒時必須注意。如果沒有在選購前鑒定抗血清質量的經驗,應請有條件的單位鑒定之。

      ② 上法中標本(血清)稀釋200倍是為了便于手工操作(加樣100&mu;l),如有精密加樣器,可作20倍稀釋(用10&mu;l)。為了適合不同實驗室的條件(如不同類型的自動化儀器),作適當修改時應注意抗原抗體的比例,必須十分注意反應體系中不可有抗原過量,線性上限不可低于2.5g/L。換言之,抗血清用量必須充裕,否則標本中apoA-Ⅰ高水平時測出結果偏低。目前國內某些商品試劑盒不但抗血清效價過低,操作中所定標本用量又過大(如3-5&mu;l),抗體明顯不足,測出結果必然不準確。

      ③ 為了達到準確測定的目的,apoA-Ⅰ與B比濁測定(終點法)中必須作校準曲線計算結果。一定范圍(低標本用量)濃度(X)與濁度(Y)基本上成直線關系,直線回歸計算出在Y軸上有一定截距(A值<0.1),所以用單點校準計算結果偏差較大,使測出結果不能準確反映濃度的高低(高的偏低,低的偏高)。千萬不要因為單點法簡便而忽略了測定的準確性。無論用何種自動化儀器,必須先試作校準曲線。如果在所用儀器及特定條件下反復測試,回歸線的截距不明顯時,才能采用單點校準法。標本用量在3-5&mu;l時,即使加大抗血清用量,濃度與濁度也不成直線關系,只能用曲線直線化轉換后計算。

      ④ 主要干擾因素是血清本身的混濁(如高脂血清),用超離心或脂肪酶水解等標本預處理方法都不實用。用表面活性劑消濁的作用也有限,所以在測定中必須作標本空白管。除了自動分析中可采用兩點法外,手工法用單一試劑而不扣除標本空白的做法是錯誤的。為了減少基質效應對濁度反應的影響,必須用定值血清作校準物。此外,塵埃粒子、比濁皿劃痕等干擾也必須排除。

      ⑤ 有的商品試劑盒(包括某些進口產品)所附校準血清定值不準確,是誤差的重要來源。

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