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    發布時間:2022-09-22 11:34 原文鏈接: 關于丙二醛的測量方法介紹

      一、原理

      丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標,在酸性和高溫度條件下,可以與硫代巴比妥酸(TBA)反應生成紅棕色的三甲川(3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二酮),其最大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾,其中最主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應產物的最大吸收波長在450nm,但532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加,因此測定植物組織中MDA—TBA反應物質含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應物在532、450nm處的消光度值,所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應中需一定量的鐵離子,通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug/g,根據植物樣品量和提取液的體積,加入Fe3+的終濃度為0.5umol/L。

      二、試劑

      1、質量分數為10%三氯乙酸(TCA);

      2、質量分數0.6%硫代巴比妥酸:先加少量的氫氧化鈉(1mol·L-1)溶解,再用10%的三氯乙酸定容;

      三、方法

      1、MDA的提取 稱取剪碎的試材1g,加入2mll0%TCA和少量石英砂,研磨至勻漿,再加8mlTCA研磨,勻漿在4000r/min離心10min,上清液為樣品提取液。

      2、顯色反應和測定 吸取離心的上清液2ml(對照加2ml蒸餾水),加入2ml0.6%TBA溶液,混勻物于沸水浴上反應15min,迅速冷卻后再離心。取上清液測定532、600和450nm波長下的消光度。

      四、結果

      C1=11.71D450

      C2={6.45(D532  -D600)  -0.56D450}NW-1

      C1——可溶性糖的濃度(mmol/L)

      C2——MDA的濃度(·umol/L)

      D450、0532、D600分別代表450、532和600nm波長下的消光度值。

      N:提取液總體積(ml)

      W:植物組織鮮重

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