3)抗原抗體反應:
用釋釋液1:8000稀釋單克隆抗BSA抗體，每孔加50μl，室溫(～22℃)下45min，洗板孔15次×10min，去除未結合的抗體分子。
4)鏈親合一蛋白A結合反應:
每孔加入50μl用稀釋液稀釋的已與生物素-pUC19結合的鏈親合素-蛋白A嵌合體，室溫(～22℃)50min，使得嵌合體-pUC19結合于固相的抗原抗體復合物上，然后洗板15次×10min，再用無NaN3的TBS洗
3次，然后即可將微滴板用于后面的PCR反應。
5)PCR
實驗條件 50mmol/L KCI、10mmol/L
Tris-HCI(20℃pH8.3)、1.5mmol/LMgCl2、明膠(10μg/ml)、0.8mmol/LdNTPs(每種0.2mM)、
2μM引物(每一引物1μM)和TaqDNA多聚酶(50U/ml)。
PCR周期
PCR前，用紫外線(UV)(254nm)照射上述反應混合物，然后將之加入到微滴板孔中，每孔40μl，再加20μlUV照射的石蠟覆蓋，按下述溫度在
PCR儀上進行PCR周期:起始變性94℃5min;30個周期:變性94℃5min，退火58℃1min，延伸72℃1min，最后延伸72℃
5min，得到的PCR產物為特定的261bp的片段。
參考流程
1. 用0.85% NaCl將細菌溶液稀釋至一定濃度。
2. 加50μl于微孔板內，4℃過夜。同時設陰性對照（加50μl 0.85% NaCl于另一孔內）。
3. 用400μl的0.05% 溫20pBS（以下簡稱TPBS），洗滌五次。
4. 加入2.25%的100μl正常山羊血清(NGS) PBS封閉2小時.
5. 用含0.15% NGS的TPBS洗3次.
6. 加入100μl用0.75% NGS適當稀釋的單克隆抗體(內含100μg的鮮魚精DNA),室溫孵育30min.
7. 用TPBS洗滌五次.
8. 加入50μl適量稀釋的生物素化抗鼠IgG抗體,室溫孵育30min.
9. 用TPBS洗滌五次.
10.加入60μl適量稀釋的生物素化DNA和親和素,室溫孵育 30min.
11.用TPBS洗滌五次,再用HPLC級水洗三次.
12.PCR擴增:加入50μl PCR反應液(內含T3和T7引物),95℃ 60sec,50℃ 110sec,72℃
110sec,循環30次.取PCR產物10μl于1.7%瓊脂糖凝膠上電泳,和核酸分子量標準相比較,在相應的位置郵現電泳帶為陽性.必需時將電泳結果照像,進行定量分析.