免疫PCR(IM-PCR)注意事項
(1)固相載體的選擇：主要取決于抗原在固相載體上的吸附程度。如果抗原吸附良好，可以進行IM-PCR。如果抗原吸附不良，則需選用雙抗體夾心IM―PCR。另外選用的固相載體要和PCR儀器相匹配。一般用0.5ml的塑料反應管，也可以用微量滴定板。
(2)待檢抗原的特異性抗體：這是決定本法特異性和敏感性的關鍵試劑，使用相應的McAb為宜。將抗體進行生物素標記后，可用于直接IM―PCR，或以生物素化的二抗來連接親合素和生物素化DNA分子，用于間接IM―PCR。
(3)連接分子：用于連接兩個不同的分子，在IM―PCR中，就是把作為模板的DNA標記分子連接到目的物(例如抗原)上去。并且要求此種連接是特異的，高親和性的。為此，常用生物素及其結合蛋白―親合素或鏈霉親合素作為連接分子。只要將需要連接的分子標以生物素，就可以通過親合素將它們連接起來。Sano等(1992)用的是重組的鏈霉親合素與A蛋白的嵌合體，它一方面可借親合素與生物素化DNA分子(質粒)相結合，另一方面可以通過A蛋白與所測抗原的相應抗體(IgG)的Fc段相結合。此種連接分子操作步驟少，但A蛋白部分可引起非特異性結合，使反應的本底增高，而且無市售商品試劑可得。后來Ruzicka等(1993)用親合素―生物素化DNA復合物作為連接分子。系用親合素與生物素化的特異性DNA分子相結合而制得，其優點是親合素有市售品可獲得。與親合素相連結的特異性抗體一生物素結合物也有商品試劑存在的問題,主要是親合素分子有4個亞基可分別與生物素分子相連接,于是在制備復合物時，可因反應物的濃度差異，生成5種不同飽和度的產物。這種不均一性使得反應的敏感性和重復性降低。因此，Zhou 等主張將親合素獨立地加入，并認為這是保證重復性的簡化步驟。目前使用的親合素有鏈霉親合素和一般親合素兩種。
(4)DNA標記分子：作為標記分子，應當考慮其來源和效果。一般應是在樣品中絕對不存在，而且純度高，均質性好的DNA。為此，選用質粒DNA或PCR擴增產物為宜。為了保證生物素標記的DNA與親合素結合的均質性，以用飽和濃度為佳。
(5)引物：除與DNA分子互補外，還須考慮到它的特異性、敏感性或擴增效果。因為所用引物的濃度過高時，會由于非特異性結合使本底過高；濃度過低時，又會使敏感度降低。一般如需定量檢測，選用飽和量的引物。