1. 制備抗原樣品，并用小型或標準尺寸的單向或雙向凝膠分離蛋白，在一個或多個泳道中分離預染色或生物素酰化的蛋白質分子量標準。
2. 電泳完成后，拆卸凝膠夾層，去除積層膠。以適量的轉移緩沖液室溫平衡凝膠30 min。
3. 將轉移盒放入一個較大的托盤中，加入足量的能蓋沒整個轉移盒的轉移緩沖液。
4. 在塑料轉移盒的底邊，依次將下面物品組裝轉印夾層墊或海綿，一張剪切得如凝膠大小的濾紙，并預先以轉移緩沖液濕潤凝膠，用一試管或玻璃棒在凝膠表面緩慢滾動，以排去凝膠和濾紙間的氣泡。
圖一、利用轉印槽進行免疫印跡
5. 準備轉印膜，按凝膠大小但各邊都比凝膠大約1 mm 剪膜。成45。地慢慢將凝膠放入蒸餾水中，水將會滲進膜中并潤濕整個表面。然后在轉移緩沖液中平衡10~15 min，PVDF膜短暫地在100%甲醇中放一下，然后在轉移緩沖液中平衡10~15 min。
6. 用轉移緩沖液濕潤凝膠表面，直接將已潤濕的膜放在凝膠頂部，排去氣泡。 7. 潤濕另一張Whatman 3MM 濾紙，并置于膜的陽極面，排去所有氣泡，在濾紙的頂部放另一塊Scotch-Brite墊或海綿。
8. 將轉移盒頂部的半面放置適當，扣緊，完成組裝。
9. 往轉移槽中加入轉移緩沖液，按正確的極性方向將轉移盒放進電轉儀中，連接電源。
10. 在冷卻條件下100 V 電轉30~60 min，或在冷室中14 V 電轉過夜，
11. 關電源，拆卸轉印裝置，取出轉印膜，并在膜上剪一小角或用軟性鉛筆或Paper-Mate筆作上標記定位。 12. 凝膠用考馬斯亮藍染色以確定轉移效率。需要時，也可將硝酸纖維素膜或PVDF膜以輔助方案提供的可逆染色方法使蛋白質顯跡，也可用如考馬斯亮藍、印度墨墨汁、萘酚藍或膠體金不可逆染色。
13. 進行蛋白質的免疫雜交和顯跡。 展開 | 