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    發布時間:2021-05-12 14:02 原文鏈接: 依賴核酸序列的擴增技術敘述

      國內外的研究結果均表明,草莓組織中富含多糖等物質,分離優質核酸較困難,核酸巾的雜質影響taq DNA聚合酶的活性,從而影響PCR技術在草莓病毒檢測中的應用。為了提高利用PCR技術草莓病毒檢測的穩定性,國內外的學者在草莓核酸提取方法做了較多的研究,利用OIAGEN公司生產的植物RNA提取試劑盒(Plant RNeasv Kit)能夠快速地(約1h)從草莓葉片中提取出較高質量的總RNA。但是這種試劑盒很貴,不適合用于大規模精細的研究應用。

      NASBA中主要是反轉錄反應和T7 RNA聚合酶合成RNA的反應。一般認為核酸中的多酚、多糖雜質對反轉錄酶的影響相對較小。對T7 RNA聚合酶受影響可能也較小.而且即使在有DNA污染或存在的情況下.同樣具有較高的特異性和靈敏度。NASBA還具有高靈敏度的優點,與嵌套PCR(Nested PcR)靈敏度相近。因此,利用NASBA檢測草莓植株中的病毒比利用PCR檢測草莓植株中的病毒更為有利。在不涉及病毒含量的定性檢測研究中。可以采用瓊脂糖凝膠電泳來檢測NASBA產物。

      NASBA技術不需要PCR儀,在一般實驗室內即可完成,而靈敏度高于PCR,對DNA病毒、RNA病毒和類病毒都可以檢測,在檢測RNA病毒時不受模板中DNA的干擾。為了提高精度,還可以使用分子信標,一般將NASBA技術和分子信標結合稱之為AmpliDet RNA。NASBA在檢測果樹病毒中最早應用于CTV的研究中,以葉片、樹皮為試材皆可以穩定地進行檢測。Vaskova等利用NASBA結合分子信標對SVBV進行了檢測,靈敏度可達到lng(納克)左右。此外,NASBA技術還被用于檢測南芥菜花葉病毒、懸溝子環斑病毒、番茄黑環病毒和番茄環斑病毒、柑橘裂皮類病毒、柑橘類病毒IV的研究中。利用NASBA技術也可以同時檢測多種病毒,如Klerks等同時檢測馬鈴薯卷葉病毒和馬鈴薯病毒Y,Szemes等同時檢測PVY的3個株系。

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