儀器設置
波長、延遲和整合設置都已針對基于雙單色器的SpectraMax M5e讀板機進行了優化。尤其注意，XL665/d2的最佳發射波長為668nm而非HTRF產品信息中所說的665nm。
結果
最佳結果來自基于細胞的cAMP測定，其使用384-孔微孔板并以每孔大約4,000CHO-M1細胞接種(40 μL檢測終體積)。最優細胞密度根據細胞類型和特定測定條件可能改變。用福斯高林處理細胞一小時后，獲得關于EC50為11.4 μM和Z’ 因子為0.86的劑量應答曲線(圖1)。使用Cisbio比值方程計算的Delta F%值范圍從47到707(表2)，與觀察到的cAMP標準曲線(圖2，表3)相似。
在基于細胞的IP-One測定中，優化的細胞密度為384-孔微孔板每孔10,000個CHO-M1細胞(40 μL最終測定體積)。碳酰膽堿刺激一小時得到的EC50為0.64 μM和Z’ 因子為0.91的劑量應答曲線(圖3)。使用Cisbio比值方程計算的Delta F%值范圍從3402到12539(表4)。
根據IP-One HTRF產品說明書直接準備的IP1標準品生成的校準曲線其Z’ 因子為0.84(圖4)且Delta F%值范圍從820到11883(表5)。
總結
具有HTRF認證的SpectraMax M5e多功能微孔板讀板機多功能微孔板讀板機提升了雙單色器系統和多模式檢測功能靈活性，擴展了研究者們的檢測方法范圍。當在SpectraMax M5e讀板機上運行IP-One和cAMP HTRF測定時，展示了非常寬的動態范圍和范圍從0.78到0.91的完美Z’ 因子。使用SoftMax Pro軟件的預設HTRF實驗模板大大簡化了數據分析。
參考
1. TR-FRET Basics (www.htrf.com)
2. Zhang, J. H.,
Chung, T. D. Y., and Oldenburg,K. R. (1999). A simple statistical
parameter for use in evaluation and validation of high throughput
screening assays. J. Biomol Scrn 4(2): 67-73.
3. cAMP dynamic 2 HTRF kit package insert(Cisbio international, France).
4. IP-One HTRF kit package insert (Cisbio international, France).