（1）取原代培養的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按105細胞/毫升重新接種培養。
（2）在細胞半匯合時，準備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細胞的量加入到培養瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
（3）細胞經上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養液、再培養24小時，胰蛋白酶消化細胞制成懸液，按5×104（104細胞/cm2）接種入新培養基中。
（4）48小時后，即可用于細胞克隆之用。
制備濃度為1 mg/ml的多聚右旋賴氨酸的水溶液，用以濕潤培養瓶底。倒出多聚賴氨酸溶液，用5ml PBS沖洗一次后，可立即使用，或存數周內使用。