| 實驗步驟 | 材料與設備
雞胗（25 個；保存于-20°C)(如，Pel-Freez,Inc.)
2-巰基乙醇（2-ME; 分子量 78.13Da; 密度 1.114)
聚丙烯燒杯（4000-ml)
勻漿器（如，BrinkmarmPolytron)
聚碳酸酯離心管（6x500-ml)
超速離心機，備有 3000-ml 體積的轉頭
帶刻度的聚丙烯量筒（4000-ml)
粗棉布
聚丙烯漏斗（大的，寬嘴型)
試劑
緩沖液 H(10X)
(配方，見“試劑的配制”PP.82~83)
操作程序
1) 取雞胗，室溫下解凍 2 h, 然后 4°C 過夜。
2) 用手術刀除去每個胗的兩葉之間的白色結締組織，但不必擔心主葉周圍的少量結締組織。棄去結締組織，將胗切成約 1cm3 的小塊。
3) 稱量清理好的胗組織塊，并記錄重量。
4) 用蒸餾水稀釋 10x 緩沖液 H 儲液 f 配制成 2L1x 緩沖液 H, 每 L 加 70.1ul 2-ME, 使終濃度為 1 mmol/L 2-ME。
5) 將胗組織置 4000-ml 聚丙烯燒杯中，加人 2 倍體積（即，2 ml/g) 的1x 緩沖液 H。例如，若有 400 g 組織，則加 800 ml 緩沖液。于冷室中，將緩沖液中的組織轉移至勻漿器，以接近最髙的速度勻漿三次，每次 30s。
6) 將勻漿倒入 500-ml 聚碳酸酯離心管中，用巴氏吸管平衡（勻漿相當粘稠，故需折去巴氏吸管的尖端使吸管口變大些）。于髙速離心機中，4°C，8000r/min 離心 30 min
7) 將上清倒人置有兩層粗棉布的聚丙烯漏斗中，濾至帶刻度的聚丙烯量筒。讓上清沿量筒側壁注人，使提取物不致產生大量泡沫（如倒啤酒不讓起酒沫那樣）。用刮勺將沉淀物取出，合并，放回聚丙烯燒杯。加 1 倍體積的 1X 緩沖液 H〔以原材料的原始濕重為基礎（見上文第 3 步〕。重復勻漿并離心。
8) 合并第一、二次所得的上清，記錄總體積。留取 0.1%(約 1 ml) 體積的上清供隨后的活性測定用。你將需要知道這兩個體積以作計算。 展開 |
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