從全血和體液中提取基因組DNA的操作步驟

提取DNA需要的儀器和試劑：

⑴ 1.5ml 離心管

⑵ 移液管: 1000μl, 200μl, 40μl 各一支和移液管尖頭: 100-1000μl, 1-200μl 各一盒

⑶ 微型濾柱（備用）

⑷ 小型旋轉混合器一臺

⑸ 小型離心機: 可放入1.5ml 離心管和2ml收集管.

⑹ 恒溫水浴

⑺ 電冰箱: -20℃, 4 ℃

⑻ 無水乙醇(自備)

⑼ 70% 乙醇(自備)

⑽ DNA提取試劑盒。內含: ⑴ 裂解液1 ⑵ 裂解液2 ⑶消化液 ⑷純化液 ⑸彌散液 ⑹蛋白酶K ⑺ 帶鉤細玻棒一盒 ⑻ 微型濾柱若干。

一．從1ml全血或體液中提取DNA的步驟：

⑴ 裂解1： 取1ml全血，血槳，血清，淋巴細胞放入到1.5ml的離心管中，加入400μl裂解液1。上下翻轉，使沉淀物分散，旋轉脈動15秒后放入離心機中離心，離心速率為8000rpm，1min.。倒掉上層液，可見離心管底部有血色沉淀。重復此裂解步驟一次，這次是加入1ml裂解液1。 最后用移液管吸凈所有上層液棄去, 以使離心管底部的血色沉淀不再殘留有裂解液1。

⑵ 裂解2: 在上面離心管中加入1ml裂解液2。上下翻轉，務必使沉淀物分散， 旋轉脈動15秒后放入離心機中離心，8000rpm，1 min.。 倒掉上清液，可見離心管底部有微量淡紅色沉淀。重復此裂解步驟一次，這次仍然是加入1ml裂解液2，最后用移液管吸凈所有上清液棄去，以使離心管底部的灰白色沉淀不再殘留有裂解液2。

⑶ 消化： 吸取蛋白酶K 10μl ( = 0.2mg )加入到上面的離心管中，用移液管尖頭反復吹打， 使蛋白酶K與沉淀物均勻接觸后， 加入320μl消化液，上下翻轉離心管， 務必使沉淀物分散于消化液中。放入58℃水浴中消化15分鐘。最后可見澄明的消化液體。

⑷ 純化：在上面的消化液體中加入110μl純化液， 上下翻轉離心管幾下后， 離心，速率為15000rpm, 1min， 把上清液吸出放入到裝有1000μl無水乙醇的1.5ml離心管中，輕輕上下翻轉10次， 可見絮狀DNA析出。用帶鉤的玻璃棒挑起絮狀DNA放入到100μl 70%乙醇中耒回漂洗20次，鉤出DNA，在空氣中涼干一下后放入到100μl彌散液中。把DNA彌散液保存于4℃，過夜， 使之充分彌散后使用。提取完畢。

如要立即用此DNA做PCR實驗，把DNA彌散液放在58 ℃水浴中，保溫30分鐘, 用手指拍打離心管子，使DNA彌散后使用。提取完畢

⑸ 收集：(在DNA極少量， 不能用帶鉤玻璃棒挑起的情況下) 把有絮狀DNA的溶液倒入微型柱過濾器(包括濾柱和收集管)中， 濾器放入離心機內，離心: 8000rpm , 1 min.. DNA便附著在濾漠上，棄去濾液，把濾柱放回收集管上。

⑹ 吸取200μl 70%乙醇于濾柱內，離心8000rpm ，1min， 棄去濾液。把濾柱放回收集管上，再心 15000rpm ，1 min.使吸附在濾膜上的DNA不再附有乙醇。

⑺ 回收DNA: 把上面附著DNA的濾柱放入一個干凈的1.5ml 離心管中。 吸取100μl 已溫熱到58 ℃的彌散液，輕輕放入濾膜的表面， 保溫58 ℃靜置10分鐘。 離心 8000rpm ，1 min.，DNA彌散液便濾入到干凈的1.5ml離心管內。此DNA彌散液可即時作PCR實驗用。提取完畢。

附：如從2ml全血中提出取DNA，方法和步驟與從1ml全血一樣，只是在步驟⑷ 純化之前，把兩個1ml全血的消化液管內容物合并后，加入220μl純化液，上下翻轉離心管幾下后， 離心，速率為15000rpm, 1min， 把上清液吸出放入到裝有1800μl無水乙醇的2ml管中，輕輕上下翻轉10次， 可見絮狀DNA析出。用帶鉤的玻璃棒挑起絮狀DNA放入到200μl 70%乙醇中耒回漂洗20次，鉤出DNA，在空氣中涼干一下后放入到100μl彌散液中。把DNA彌散液保存于4 ℃，過夜， 使之充分彌散后使用。提取完畢。

如要立即用此DNA做PCR實驗，把DNA彌散液放在58 ℃水浴中，保溫30分鐘, 用手指拍打離心管子，使DNA彌散后使用。提取完畢。