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    發布時間:2022-04-08 13:16 原文鏈接: 什么是PCR

    PCR是聚合酶鏈式(Polymerase Chain Reaction)反應的簡稱,是一種將幾個或幾十個拷貝數DNA片段擴增至上百萬份拷貝的方法,這是迄今為止最為重要的技術之一。PCR技術的影響不僅僅局限于生物科學領域,幾乎人人都可以感受到PCR所帶來的改變,在親子鑒定以及犯罪調查中PCR技術便有廣泛應用。

    PCR可以被認為是與發生在細胞內的DNA復制過程相似的技術,其結果都是以原來的DNA為模板產生新的互補DNA片段。細胞中DNA的復制是一個非常復雜的過程。參與復制的有多種因素。PCR是在試管中進行的DNA復制反應,基本原理與細胞內DNA復制相似,但反應體系相對較簡單。

    PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:

    ①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;

    ②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;

    ③引物的延伸:DNA模板--引物結合物在Taq酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。

    重復循環變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。


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