什么叫核酸檢測？

　　近日，北京協和醫院發布了新型冠狀病毒核酸檢測標準操作流程的培訓視頻，供其他符合條件的醫療機構在開展新型冠狀病毒核酸檢測時參考。

　　一、個人三級防護穿戴

　　帶一次性帽子、佩戴醫用N95口罩、一次性防護服、一次性鞋套、一次性防水靴套、一層乳膠手套、外層一次性隔離衣、防護目鏡、第二層乳膠手套、穿戴完畢后應盡快通過專用緩沖間或者走廊，進入核酸提取區（專業核酸提取實驗室）。

　　二、樣本滅活處理

　　新冠核酸檢測須有兩名工作人員快速通過進入實驗室，進行滅活實驗操作。生物安全柜內需配備吸水棉與消毒酒精、有條件可配備吸水臺布，對樣本溢灑時進行緊急處理；打開二級容器，用75%酒精消毒物體表面，檢測樣本管密閉性后進行滅活處理，滅活條件（56℃，30min，水浴等多種方式），取出酒精滅活管用酒精擦拭外表，將樣本放入到生物安全柜內。

　　三、手工核酸提取

　　操作人員進入試劑配置區或者單獨的潔凈實驗室。

　　一、試劑區準備

　　根據說明說要求，在AW1中加入無水乙醇130mL，在AW2中加入無水乙醇160mL，計入無水乙醇后及時做好標記，在310μg的Carrier RNA中加入310μL AVE，并顛倒混勻使Carrier RNA充分溶解，就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置，而后通過傳遞窗傳送到樣本處理區，或者由專人送到核酸提取實驗室中。

　　二、樣本的裂解

　　用1.5ml的無菌EP管，移液器移取560μl AVL裂解液，加入5.6μl Carrier RNA，加入140μl的已滅活的待提取核酸的待測樣本，渦旋振蕩15s，室溫靜止10min。將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物，防止污染。裂解完成后，加入560μl無水乙醇，振蕩混勻15s，將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物，防止污染。

　　向離心柱加入裂解產物630μl，8000轉離心1min，若離心機在生物安全柜之外，每次使用都需進行外表面消毒。更換新廢液收集管，要從離心機中小心取出離心柱，將上層離心柱轉移到新收集管中，繼續將剩余裂解產物630μl加入離心柱中，若樣本體積大于140μl時需重復此步驟，直到全部裂解產物都過柱離心，8000轉離心1min，小心將離心柱轉移到新的收集管中。

　　取500μl AW1加入離心柱中（注意，此處加樣操作時務必將移液器吸頭接觸離心柱內壁緩慢加樣），8000轉離心1min。小心取出離心柱，更換新的收集管。

　　取500μl AW2加入離心柱中，14000轉離心3min，小心取出離心柱，更換新的離心柱上端收集管，置于離心機中使用最大轉速離心1min，以確保將AW2中的殘液完全離心干凈。

　　取無菌1.5mlEP管收集核酸，將離心柱上端小心放入1.5mlEP管中，取40-60μl的洗脫液AVE加入到離心柱中（注意：洗脫液應盡量全部覆蓋住離心柱膜），用EP管管蓋蓋住離心柱，使用無菌剪刀剪去原離心柱管蓋。

　　室溫靜止1min，將其放入離心機中8000轉離心1min，回收核酸。丟棄離心柱，EP管中即為獲取的提取核酸，做好標記與登記。

　　四、用儀器提取核酸

　　首先按照說明說準備核酸提取試劑，將200μl滅活樣本添加到核酸提取試劑中，根據核酸提取儀的設置程序上機提取核酸，等儀器操作結束，提取核酸完成，回收核酸。

　　五、PCR體系配置

　　根據檢測樣本數量配制體系，將配制好的PCR體系充分混勻并離心后，將其通過傳遞窗送至樣本處理核酸加樣區，或單獨的樣本加樣實驗室。按照每孔分裝20μL反應體系，進行分裝，在各孔分別加入5μL待測樣本核酸或陰陽對照物（請注意每次檢測器包含1個陽性對照和3個陰性對照且陰性對照需隨機分布），密封PCR管，有條件時模板加樣盡量在單獨的生物安全柜進行。

　　工作人員將配好的PCR管通過傳送窗口送至PCR擴增區，或由專人送至PCR擴增實驗室，上機檢測。

　　六、上機檢測及結果分析

　　工作人員進入基因擴增分析實驗室，從傳遞窗取出PCR反應管，上機前需混勻并離心反應體系，按試劑盒說明說設置擴增參數并分析判讀結果。分析結果時，嚴格閱讀說明說充分了解試劑盒靈敏度、方法學局限性等綜合判讀實驗結果。

　　為防止擴增污染，反應結束后的PCR擴增管嚴禁開蓋并裝入密封帶中裝入指定的垃圾桶中。

　　七、檢測后的消毒處理

　　新冠樣本處理完成后，工作人員應用75%的酒精消毒處理外層手套并脫下外層手套，放入生物安全柜中的生物垃圾桶中。檢測完成后，生物安全柜臺面和地面應用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇進行擦拭。將安全柜內產生的醫療垃圾用三層垃圾袋密封，并將其放入指定垃圾桶中，垃圾袋上需標記醫療垃圾信息。實驗結束后，生物安全柜以及實驗室均要進行紫外燈照射消毒，時間至少30min。

　　實驗操作人員，應有他人用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇對一次性隔離衣均勻噴霧消毒處理，而后脫去隔離衣將新冠檢測醫用垃圾放入制定垃圾桶中，工作人員在離開二級實驗室后，應在緩沖區或走廊按順序摘脫個人三級防護用品，首先應帶新的外層手套，摘掉護目鏡并置于75%乙醇中消毒，自上而下、自內向外翻轉脫掉一次性防護服，脫去外層手套，摘除口罩、一次性帽子、脫一次性鞋套。脫掉手套，新冠病毒防護服均需進行高壓滅菌處理。高壓前后醫療垃圾嚴格區分。

　　新冠病毒相關垃圾需在120度，30min條件進行濕熱高壓處理，以高壓試紙條變色為有效，而后作為普通醫療垃圾處理。