親和免疫組織化學實驗——LSAB法

LSAB 法或稱 S-P 法、SABC 法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有 HRP 或 AKP 酶的鏈霉親和素（streptavidin）連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量 60000，不含糖鏈，等電點 pI 為 6.0～6.5。鏈霉親和素同一定濃度的生物素化酶混合后，就能形成鏈霉親和素-酶復合物，這種復合物中至少存在 1 個尚未被生物素占據的親和素結合位點，可以和各種生物素標記抗體結合。由于采用了改良的親和純化技術和酶標技術，LSAB 法敏感性更髙、背景更清晰，其原理見圖 5-3。

石蠟切片非免疫性動物血清

蛋白酶PBSH2O2樹膠特異性一抗生物素標記二抗過氧化物酶鏈霉親和素

1. 石蠟切片常規脫蠟至水，PBS 洗 3×3 min。

2. IHC 的前處理視特異性一抗不同，可采用蛋白酶消化或熱誘導的微波抗原修復（AR），PBS 洗 3×3 min。

3. 3％ 過氧化氫孵育 10 min（可省略），以阻斷內源性過氧化物酶活性。

4. PBS 洗 3×3 min。

5. 10％ 非免疫性動物血清孵育 10 min（可省略），以減少非特異性背景，無需沖洗，只需吸去多余血清。

6. 滴加適當稀釋的第一抗體，37℃ 孵育 60 min 或 4℃ 過夜。

7. PBS 洗 3×3 min。

8. 滴加生物素標記的二抗，37℃ 孵育 30～60 min。

9. PBS 洗 3×3 min。

10. 滴加過氧化物酶標記的鏈霉親和素，室溫孵育 30 min。

11. PBS 洗 3×3 min。

12. 0.04％ DAB（含 0.03％ H₂O₂）顯色 5～10 min。

13. 復染，脫水，常規樹膠封固，結果觀察。

此方法與 ABC 法相比，不需 A、B 兩液提前混合，操作者容易掌握，穩定性高，由于采用了低等電點的鏈霉親和素，其內源性生物素干擾要低于 ABC 法。目前該法仍將是診斷和研究的常用方法，有現成的即用型 S-P 試劑盒出售，種類很多，還有針對一抗是羊、雞、大鼠、小鼠和兔的試劑盒。該法生物素化二抗和鏈霉親和素-HRP（AKP）的孵育（室溫）時間僅需 10～15 min，其敏感性和所用時間與 EnVision 法一致。其最大的缺點是內源性生物素的干擾。