親和免疫組織化學實驗——ABC法

ABC 法即親和素-生物素-過氧化物酶復合物法，是許世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基礎上改良的，其特點是利用親和素分別連接生物素標記的第二抗體和生物素標記的酶。ABC 法與 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗體不為生物素所標記，生物素標記的第二抗體與 ABC 復合物相連接，最后進行顯色反應定位。復合物是將過氧化物酶結合在生物素上，再將生物素-過氧化物酶連接物與過量的親和素反應而制備的。ABC 法與 LAB 法、BAB 法相比較具有敏感性高、特異性強、背景染色淡等優點。

石蠟切片非免疫性動物血清

蛋白酶PBSH2O2樹膠特異性一抗生物素標記二抗ABC 復合物

1. 4 μm 石蠟切片常規脫蠟至水，PBS 洗 3×3 min。

2. IHC 的前處理視特異性一抗不同，可采用蛋白酶消化或熱誘導的微波抗原修復（AR），PBS 洗 3×3 min。

3. 3％ 過氧化氫孵育 10 min（可省略），以阻斷內源性過氧化物酶活性。

4. PBS 洗 3×3 min。

5. 10％ 非免疫性動物血清孵育 10 min（可省略），以減少非特異性背景，無需沖洗，只需吸去多余血清。

6. 滴加適當稀釋的第一抗體，37℃ 孵育 60 min 或 4℃ 過夜。

7. PBS 洗 3×3 min。

8. 滴加生物素標記的二抗，37℃ 孵育 30～60 min。

9. PBS 洗 3×3 min。

10. 滴加 ABC 復合物（提前 30 min，A 液與 B 液等量混合），37℃ 孵育 30～60 min。

11. PBS 洗 3×3 min。

12. 0.04％ DAB（含 0.03％ H₂O₂）顯色 5～10 min。

13. 復染，脫水，常規樹膠封固和結果觀察。