剛開始養SK-BR-3時,細胞狀態不是很好,貼壁也不均勻,于是開始想辦法,考慮是不是吹打的不夠,或是傳得過多,或是其它的什么,后來發現的確如此,細胞的生長狀態與傳代的方法有很密切的聯系。
我的傳代方法是:
以50平方厘米培養瓶為例,待細胞長滿瓶底70%-80%
1 、吸除或倒掉瓶內舊培養基。
2 、PBS 5ml加入培養瓶,輕輕晃動培養瓶,讓PBS流遍細胞表面,倒掉。
3 、PBS 5ml加入培養瓶重復洗一次,倒掉。
4 、加入1ml胰蛋白酶消化液,輕輕搖動培養瓶,使消化液流遍所有細胞表面,然后置37度5%的二氧化碳培養箱放置5分鐘,在顯微鏡下觀察,發現細胞脫壁、變圓即可。
5、 加入含血清的培養基5ml中止消化,吸取瓶內培養液,反復輕輕吹打瓶壁細胞,確保所有的瓶底都要吹打到。
6、 吸1/3至1/4的細胞懸液接種至新的培養瓶,然后加8ml的新的細胞培養基,置37度5%的二氧化碳培養箱完成傳代。