在包括兩對基因的雜交中,一次雜交可以測定兩個基因之間的距離,通過三次雜交便可以測定三個基因的排列順序和距離。但是在包括三對基因的一次雜交中,便可以測定三個基因的排列順序和距離,這就是1913年由斯特蒂文特首創的三點測驗方法。例如黑腹果蠅的X染色體上有黃體基因(yellow body,y;野生型灰體,y)、白眼基因(white eye,w;野生型紅眼,w)和短翅基因(miniature wing,m;野生型長翅,m)。將黃體、白眼、短翅雌蠅和野生型雄蠅 (ywm 即+++)雜交,將得到的雌性雜合體 再和雄性子代ywm雜交,得到子二代個體。
從表中的數值求得:
基因y和w之間的重組頻率=1.3%
基因w和m之間的重組頻率=32.8%
基因y和m之間的重組頻率
因此這三個基因在染色體上的相對位置如圖2。三點測驗或者包括更多的基因的雜交還可以用來研究交叉干涉、染色單體干涉等現象。