七個不同產地牛蒡子中牛蒡苷的含量比較

　【摘要】 目的對七個不同產地牛蒡子中的牛蒡苷進行含量測定，做出質量評價。方法采用薄層色譜法(TLC)進行定性鑒別，高效液相色譜法(HPLC)進行含量測定。結果吉林產牛蒡子中牛蒡苷含量最高,質量較好；甘肅定西、四川康定、寧夏銀川產牛蒡子中牛蒡苷的含量亦較高。結論甘肅雖不是牛蒡子主產區，但甘肅定西栽培及野生牛蒡子中牛蒡苷含量較高，質量較好。

　　【關鍵詞】 牛蒡子；牛蒡苷；薄層色譜法；高效液相色譜法；含量測定

　　1儀器與試藥

　　美國安捷倫Agilent 1100型高效液相色譜儀；牛蒡苷對照品（由中國藥品生物制品鑒定所提供，批號0819－9802）；甲醇（色譜純）；水為純凈水；其他試劑均為分析純；七個地區牛蒡子藥材分別采集或采購于各自產地，由甘肅中醫學院李成義教授鑒定為菊科植物牛蒡Aretium lappa L.的干燥成熟果實。

　　2方法與結果

　　2.1 定性鑒別

　　2.1.1 對照品溶液的制備

　　精密稱取牛蒡苷對照品適量配制成行氣活血、疏通經絡的作用。生理解剖學也證實，華佗夾脊穴周圍是脊神經所在，深層分布著脊神經節，它們借節間支連成交感神經，交感神經干與脊神經的連結點在體表的投影與華佗夾脊穴密切相關。

研究還進一步證實，針刺華佗夾脊穴不但可影響脊神經后支還可涉及其前支，前支與交感干相聯系，能影響交感神經，從而與臟腑活動相關，具有調節臟腑氣血的功能。因此，針刺華佗夾脊穴有調節植物神經系統功能的作用，可使交感、副交感神經的拮抗作用協調統一，從而治療植物神經系統紊亂引起的疾病。

從華佗夾脊穴與經絡、臟腑、神經之間的特異聯系可以看出，其穴區分布有脊神經節，且穴位分布廣泛，故而其整體作用明顯，療效持久，共同達到寬膈止呃、甚而治療頑固性呃逆的作用。

　　本觀察治療中第2組穴選取璇璣、膻中、中脘、梁門（雙）、天樞（雙）、氣海，其中膻中為“氣會”，璇璣與膻中可調理上焦之氣，中脘與梁門可調中焦氣之樞紐，和胃降逆，而天樞與氣海可調下焦之氣。上中下三焦之氣既達，上下宣通，氣機調暢，更兼第1組華佗夾脊穴腹背陰陽相配，引陽而出陰，共奏寬膈舒胸、理脾和胃、降氣止呃之功。0.5 mg/mL的對照品溶液，備用。

　　2.1.2 對照藥材溶液的制備

　　取牛蒡子對照藥材粉末0.5 g，加乙醇20 mL，25 ℃下超聲處理30 min，濾過,濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL溶解，作為對照藥材溶液。

　　2.1.3供試品溶液的制備

　　取牛蒡子藥材粉末0.5 g，加乙醇20 mL，25 ℃下超聲處理30 min，濾過,濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL溶解，作為供試品溶液。

　　2.1.4 薄層色譜檢識

　　依照薄層色譜法試驗方法，吸取上述對照品溶液、對照藥材溶液、供試品溶液各10 μL，分別點于同一塊以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷―甲醇―水（40∶8∶1）為展開劑，上行展開8 cm取出，晾干， 20 %硫酸乙醇溶液顯色，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。

　　結果顯示各供試品溶液色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，分別顯相同顏色的斑點。結果見圖1。

　　1.對照藥材；2.定西（栽培1）；3.定西（栽培2）；4、8.對照品；5.定西野生； 6.四川康定； 7.寧夏銀川； 9.山東濟南； 10.平涼； 11.吉林； 12.河南

　　2.2七個不同產地牛蒡子中牛蒡苷的定量分析[4]

　　2.2.1 色譜條件

　　Agilent 1100型高效液相色譜儀，色譜柱為ZORBAX SB－C18（4.6 mm×250 mm），流動相為甲醇―水（43∶57），檢測波長280 nm,流速1.0 mL/min，柱溫20 ℃,進樣量10 μL，理論塔板數按牛蒡苷峰面積計算均不低于1 500。

　　2.2.2 對照品溶液的制備

　　精密稱取牛蒡苷對照品適量，加甲醇溶解，配制成0.5 mg/mL的對照品溶液,備用。

　　2.2.3 對照藥材溶液的制備

　　精密稱取對照藥材粉末（過三號篩）0.5 g,精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇約45 mL，30 ℃下超聲(150 W, 20 kHz)處理20 min,加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，作為對照藥材溶液。

　　2.2.4 供試品溶液的制備

　　精密稱取各藥材粉末（過三號篩）0.5 g,精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇約45 mL，30 ℃下超聲(150 W,20 kHz)處理20 min,加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，作為供試品溶液。

　　2.2.5樣品測定

　　精密吸取對照品溶液、對照藥材溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀中進行測定，得牛蒡苷色譜峰面積，用外標法計算樣品中牛蒡苷的含量。

　　結果顯示七個不同產區牛蒡子中，吉林產牛蒡子中牛蒡苷含量最高，甘肅定西、銀川、四川康定產牛蒡子質量次之，本實驗在濟南與平涼所采集到的牛蒡子質量較差,未達藥典標準（《中華人民共和國藥典》規定牛蒡子干燥藥材中牛蒡苷含量不得低于5.0 ％）。結果見表1表1不同產地牛蒡子中牛蒡苷含量比較

　　3討論

　　本實驗TLC定性鑒別時考察了點樣量（3 μL、5 μL、7 μL、10 μL、15 μL）及飽和時間（0，10，15，20，30 min）對邊緣效應、Rf值、斑點清晰度與擴散度的影響。結果發現飽和時間越長Rf值越小，這點與李慧義等人在牛蒡子中木質素的薄層掃描測定一文中的結論是一致的[5]。但選擇飽和15 min以上時邊緣效應基本消除，故確定飽和時間為15 min，點樣量為10 μL。

　　TLC定性鑒別顯色時考察了顯色劑的濃度及顯色方法，發現硫酸乙醇體積分數為20 %時，用浸漬法顯色效果好，故用20 %硫酸乙醇浸漬顯色。

　　各產地牛蒡子HPLC色譜圖均在7.139 min處出現吸收峰，但吉林產牛蒡子HPLC色譜圖與其他產地牛蒡子及對照藥材的HPLC色譜圖相比較,在7.139 min處出現的吸收峰峰面積較大,含量較高,但此成分的含量是否與牛蒡子質量優劣有關及其結構還有待于進一步研究。

　　通過實驗比較東北吉林所產的道地藥材牛蒡子質量較好，此外甘肅雖不是牛蒡子的主產地，但在定西地區栽培及野生的牛蒡子中牛蒡苷含量也較高，這為我省栽培牛蒡子提供了質量評判的科學依據，為豐富我省栽培藥材資源提供了參考。

　　【參考文獻】

　　[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：化學工業出版社,2005:48-49.

　　[2]任常勝，朱慶齡.牛蒡子的研究概況[J].中國民族醫藥雜志, 2003，12（增刊）:36-39.

　　[3]王勁,沙明,楊供武，等.HPLC法對不同地區商品牛蒡子中牛蒡苷元的定量分析[J].中草藥，2003,34（5）：467.

　　[4]Gao Y, Kang T G, Zhang X Y. Studies on the calium antagonist action of arctigenin [J]. Chin Tradit Herb Drugs(中草藥)，2000，31（10）：758-762.

　　[5]李慧義,羅淑榮.牛蒡子中木脂素的薄層掃描測定[J].色譜,1995，13（4）：278－279.